Douhodobé stáže
pondělí 2. září 2013
V průběhů měsíců červenec a srpen byl zakončen první cyklus dlouhodobých stáží. Stáže byly realizovány v délce 10-ti měsíců.
Stáže realizované na pracovišti příjemce MU:
1) Izolace,in vitro kultivace a zobrazování kmenových buněk
Stáž úspěšně absolvovala Mgr. Zuzana Garlíková.
Anotace stáže:
V průběhu stáže se stážistka seznámila se zásadami práce v kultivační laboratoři. Osvojila si základní postupy při manipulaci s lidskými embryonálními kmenovými buňkami a myšími embryonálními fibroblasty, což zahrnuje:
• Přípravu MEF (Mouse embryonic fibroblast) pro kokultivaci s hESc (human Embryonic Stem cells). Pasážování MEF.
• Enzymatickou- kolagenázovou pasáž. Mechanické pasážování hESc.
• Výměnu médií na buněčných liniích. Přípravu médií jak pro kultivaci hESc tak pro MEF.
• Rozlišení diferencovaných kolonií a jejich odstranění z kultivačního plastu.
• Přípravu kultivačních plastů na kultivaci a následné zobrazování buněk.
• Kryokonzervace a rozmražení výše uvedených buněčných typů.
• Zobrazování kmenových buněk pomocí světelné mikroskopie.
Po absolvování této stáže je stážistka schopná samostatně pracovat v kultivační laboratoři a provádět plánované experimenty. Rozlišit diferencované kolonie. Samostatně zajistit výměnu médií.
2) In vitro diferenciace a zobrazování kmenových buněk
Stáž úspěšně absolvovali Mgr. Jan Křivánek a Bc. Anna Kučerová.
Anotace stáže:
Stáž byla zaměřena nejprve na kultivaci lidských embryonálních buněk a jejím rutinním zvládnutí. Mimo vlastní kultivační techniky byly procvičovány též související činnosti, jako např. tvorba kultivačních médií, zamražování a rozmražování buněk. Dále byla prováděna diferenciace buněk in-vitro do neurálních linií pomocí specifických protokolů. Pro ověření diferenciační plasticity bylo provedeno ověření diferenciace neurálních buněk i do osteogenní, adipogenní a chondrogenní linie za pomoci diferenciačních médií a specifických protokolů. Pro ověření průběhu diferenciace byly vzorky taktéž zpracovávány pomocí histolochemických a imunohistochemických metod. Pro vlastní pozorování zpracovaných vzorků se použilo mikroskopických a imunofluorescenčních technik. Dalším použitým postupem bylo ověření migračního potenciálů buněk na in-vivo modelu kuřecího embrya. Vzorky byly následně zpracovány technikou hlubokozmrazových řezů, imunohistochemicky barveny a dokumentovány za pomocí fluorescenční mikroskopie.
